اس فایل

مرجع دانلود فایل ,تحقیق , پروژه , پایان نامه , فایل فلش گوشی

اس فایل

مرجع دانلود فایل ,تحقیق , پروژه , پایان نامه , فایل فلش گوشی

بررسی ایمنی زایی ژنهای L7L12 و P39 در موشهای Balac

اختصاصی از اس فایل بررسی ایمنی زایی ژنهای L7L12 و P39 در موشهای Balac دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

بررسی ایمنی زایی ژنهای L7L12 و P39 در موشهای Balac


بررسی ایمنی زایی ژنهای L7L12 و P39 در موشهای Balac

دسته بندی :  پزشکی

فرمت فایل:  Image result for word doc 
حجم فایل:  (در قسمت پایین صفحه درج شده)
تعداد صفحات فایل:    62 ص

 فروشگاه کتاب : مرجع فایل

 

 

 

 قسمتی از محتوای متن Word 

 

فصل دوم

 

هدف از این تحقیق بررسی ایمنی زایی ژنهای L7/L12 و P39 در موشهای Balac است. بنابراین پس از جداسازی و تکثیر ژنهای فوق مراحل زیر در این تحقیق انجام گرفت.

 

1- لکون نمودن ژنهای فوق در یک ناقل انتقال دهنده Cleaning vector

 

2- تعیین ترادف نوکلئوتیدی ژنهای جداشده و مقایسه آن با ژنهای L7/L12

 

3- کلون نمودن ژنها در پلاسمید بیان کننده پروکاریونی Procaryotic expression vector

 

4- تولید و تخلیص پروتئینهای L7/L12 و P39

 

5- کلون نمودن آنها در پلاسمید بیان کننده اوکاریوتی Eucaryotic expression vector

 

6- هاری کردن پلاسمیدهای فوق از آندوتوکسین

 

7- تزریق پلاسمیدها، بسویه واکنش و سویه بیماریزا بروسلاآبورتوس به موش Balb/C

 

8- سنجشهای ایمونولوژیک

 

باکتریها و پلاسمیدهایی که برای انجام این پایان نامه استفاده دشه اند بترتیب زیر می باشند:

 

باکتریها: بروسلاآبورتوس سویه های 19S و 544 اشدیشیالکی سویه

 

اشریشیالکی سویه BL21 – اشریشیاکی سویه BL21(DE3(Plyss

 

پلاسمیرها: PGEX4T1 – PRT 28a – SK+(pSK) - Pblue Script-PCDNA3

 

  • جداسازی کروموزوم بروسلا آبورتوس 19S:

 

برای تکثیر ج داسازی ژنهای L7/L12 و P39 ابتدا کروموزوم باکتری جداسازی گردید.

 

مواد:

 

بافر TE:

 

Tris – Hel             10mm

 

EDTA                  1.0mm

 

‍PH بافر را پس از تهیه برروی 8 تنظیم می نمائیم.

 

پروتئیناز K:

 

 

 

CTAB/NaCl:

 

Nacl                      4.1gr

 

CTAB                  10gr

 

DDW                    100ml (Final Volume)

 

روش:

 

ابتدا محیط برنسط برات را تهیه و استریل نموده و ml5 از محیط را با بروسط آبورتوس سویه 19S تلقیح می نمائیم. پس 48 تا 72 ساعت باکتریها رشد کرده و کدورت مناسبی را پیدا می کند. بقیه مراحل تخلیص کروموزوم بشرح زیر است:

 

1- 5/1 میلی لیتر از سوسپاستیون فوق را مدت 2 دقیقه در rpm5000 سانتریفوژ می نمائیم. محلول رویی را دور می ریزیم.

 

2- Ml576 از بافر TE را بر روی رسوب باکتری اضافه کرده و رسوب را در بافر حل می نمائیم. سپس ml30 از SDS(10%) و ml3 از پروئیناز K (mg/ml20) را افزوده و بمدت یکساعت در دمای 0C37 نگهداری می نمائیم.

 

3- پس از مخلوز Ml100 از (M5)NaCl از محلول CTAB/NaCl بمیزان Ml80 اضافه کرده و بمدت 10 دققیق در  0C65 انکوبه می کنیم.

 

4- هم حجم مخلوط بالا از ترکیب کلروفرم – ایزوآمیل (1/24) به مخلوط افزوده و سپس از مخلوط بمدت 5 دقیقه در rpm10000 سانترفوژ می کنیم. محلول رویی را به لوله دیگر منتقل می نمائیم.

 

5- هم حجم محلول روئی ترمیب فنل – کلروفرم – ایزوآمیل (1/24/25) پس از مخلوط بمدت 5 دقیقه در vpr10000 سانتریفوژ کرده و محلول رویی به لوله دیگری منتقل می نمائیم.

 

6- هم حجم محلول روئی ایزوپروپانل اضافه نموده و مخلوط می کنیم. پس از چند دقیقه DNA کروموزومی ته نشین شده که می توان بات یک پیپت پاستور آنرا جمع آوری نمائیم.

 

7- رسوب DNA کروموزومی را با الکل 70% شستشو داده و پس از خشک شدن در مجاورت هوا در Ml100 از بافر TE حل می نمائیم.

 

بررسی کمی و کیفی DNA کروموزومی:

 

برای تعیین خلوط کروموزوم باکتری از مواد و وسایل زیر استفاده میشود.


1- بافر PBE   pH=8(10X)

 

Tris – base                               890mM

 

Boric Acid                               890mM

 

EDTA                                      25mM

 

2- آگارز MP

 

3- تانک الکتروفورز افقی

 

روش:

 

(توضیحات کامل در داخل فایل)

 

متن کامل را می توانید دانلود نمائید چون فقط تکه هایی از متن در این صفحه درج شده به صورت نمونه

ولی در فایل دانلودی بعد پرداخت، آنی فایل را دانلود نمایید


دانلود با لینک مستقیم


بررسی ایمنی زایی ژنهای L7L12 و P39 در موشهای Balac