بررسی عفونت ریوی مایکوپلاسمایی ناشی از مایکوپلاسما مایکوئیدس واریته مایکوئیدس و مایکوپلاسما کاپری کولوم واریته کاپری کولوم در گوساله‌ها و بزهای کشتارشده به روش PCR
موضوع
بررسی عفونت ریوی مایکوپلاسمایی ناشی از مایکوپلاسما مایکوئیدس واریته مایکوئیدس و مایکوپلاسما کاپری کولوم واریته کاپری کولوم در گوساله‌ها و بزهای کشتارشده به روش PCR
فهرست
عنوان ................................................................................................... صفحه
الف- مقدمه.............................................. 1
ب-چکیده................................................. 3
فصل اول:کلیات .......................................... 5
1- تاریخچه ........................................... 6
2- خصوصیات کلی مایکوپلاسما................................ 6
3- مقاومت مایکوپلاسماها.................................. 8
4- طبقه بندی مایکوپلاسماها............................... 9
5- طبقه بندی کلاستر مایکوئیدس............................ 12
6- فیلوژنی............................................. . 14
7- ساختمان ........................................... 15
1-7-ساختمان مایکوپلاسما مایکوئیدس ......................... 15
2-7- ساختمان مایکوپلاسما کاپری کولوم .................... 17
8- بیولوژی مولکولی...................................... 19
9- توالی‌های تکراری...................................... 23
10- پروتئینهای سطحی.................................... 25
11- فاکتور حدت......................................... 30
12- آنالیز پروتئین .................................... 32
13- طبقه بندی سویه‌ها .................................. 34
14- مشخصات گونه مایکوئیدس.............................. 35
15- کشت و رشد گونه مایکوئیدس .......................... 38
16- کشت و رشد گونه کاپری کولوم ........................ 41
1-16- محیط Thiacourt .................................... 41
17- بیماری پلوروپنومونی واگیر گاوان..................... 44
1-17- علائم بالینی ...................................... 45
2-17- علائم کالبدگشایی بیماری .......................... 47
3-17- پاتوژنز ......................................... 50
1-3-17- مکانیسمهای مقابله با دستگاه ایمنی................ 53
4-17- اختصاصیت میزبان.................................. 57
5-17- انتقال بیماری .................................. 58
6-17- سیر همه گیری ........................................ 59
فهرست
عنوان صفحه
1-6-17- مخزن............................................ 59
2-6-17- راه انتقال..................................... 59
7-17- پیشگیری و کنترل.................................... 60
1-7-17- اقدامات لازم برای حفاظت مناطق عاری از بیماری.... 61
2-7-17- اقدامات لازم هنگام شیوع بیماری.................. 62
3-7-17- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومی................ 63
18- بیماری پلوروپنومونی واگیر بزان ..................... 63
1-18- علائم بالینی ...................................... 64
2-18- علائم کالبد گشایی................................. 66
19- گونه مایکوپلاسما کاپریکولوم کاپریکولوم............... 69
1-19- سندروم MASKePs................................... 70
2-19- علائم بالینی....................................... 71
3-19- علائم کالبد گشایی................................. 71
4-19- سندروم آگالاکتیه واگیر............................. 73
20- گونه مایکوپلاسما کاپری .............................. 73
1-20- بیماریزایی ...................................... 73
2-20- علائم کالبد گشایی................................. 74
21- سیر همه‌گیری.......................................... 75
1-21-مخزن.............................................. .. 75
2-21-راه انتقال....................................... 76
3-21-جمعیت میزبان...................................... 77
22-پیشگیری وکنترل ...................................... 77
1-22- اقدامات لازم برای محافظت مناطق عاری از بیماری..... 77
2-22- اقدامات لازم هنگام شیوع بیماری................... 78
3-22- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومی................. 78
23-واکسن................................................. 79
1-23-واکسن MmmLC ................................... 79
2-23-واکسن Mccp ...................................... 79
3-23-واکسن Mcc ...................................... 79 79-اختصاصیت میزبان در کلاستر مایکوئیدس .................. ........ 80
فهرست
عنوان ........................................................................................................... صفحه
25-تشخیص افتراقی....................................... 80
1-25-شناسایی عامل بیماری زا .......................... .. 81
1-1-25-بررسی میکروسکوپیک اگزودای ریه از طریق تهیه اسمیر یا برش بافتی 81
2-25- تشخیص آزمایشگاهی ............................... 81
1-2-25- روش کشت و جداسازی............................. 81
1-1-2-25- انتخاب نمونه ها ................................ 82
2-1-2-25- آماده سازی نمونه ها ......................... 82
3-25- تستهای بیوشیمی.................................. 83
4-25- روشهای سرولوژی.................................. 85
1-4-25- عوامل موثر در آزمایشات سرولوژی .................. 85
2-4-25- تست مهاری رشد .................................. 87
3-4-25- تست ایمونو فلورسانس .............................. 88
4-4-25- تست رسوب ژلی................................... .. 88
5-4-25- تست فیکساسیون کامپلمان .......................... 89
6-4-25- تست ممانعت از هماگلوتیناسیون ...................... 89
7-4-25- تست آگلوتیناسیون لاتکس......................... 90
8-4-25- تست الیزای رقابتی.............................. 91
9-4-25- سایر تستهای تشخیصی............................ 94
5-25 - مشکلات روشهای سنتی............................... 94
6-25- تشخیص با استفاده از PCR........................ 95
فصل دوم: روش کار
26- روش کار .......................................... 101
1-26- جمع آوری نمونه ...................................... 101
1-1-26- مواد لازم......................................... 101
2-1-26- بخش جمع آوری نمونه............................... 101
3-1-26- نمونه برداری .................................. 103
2-26- کشت و جداسازی نمونه ها........................... 104
1-2-26- مواد لازم ..................................... 104
فهرست
عنوان ........................................................................................................... صفحه
2-2-26- طرز تهیه محیط کشت اختصاصی برای جداسازی مایکوپلاسمای نشخوار کنندگان 106
1-2-2-26- مواد لازم ................................... 106
2-2-2-26- روش تهیه محیط کشت................................ 107
3-26- استخراج DNA مایکوپلاسما.......................... 109
1-3-26- روش استخراج DNA از نمونه های ارسالی............... 109
4-26- فرایند PCR .................................... 110
1-4-26- مواد لازم ..................................... 110
2-4-26- آماده سازی مواد جهت واکنش PCR .................. 112
1-2-4-26- افزوده سازی DNA نمونه‌ها .................... 112
2-2-4-26- افزوده سازی DNA کلونیهای جدا شده........... 115
3-2-4-26- تهیه مخلوط اصلی اولیه......................... 115
3-4-26- پرایمرها....................................... 115
4-26- واکنش PCR...................................... 117
5-26- تهیه ژل الکتروفورز ............................... 118
1-5-26- طرز تهیه محلول اتیدیوم برماید ..................... 119
6-26- الکتروفورز ......................................... 121
7-26- رویت باندهای ایجاد شده .......................... 122
فصل سوم: نتایج
27- نتایج ............................................ .. 124
1-27- جداسازی......................................... 124
1-1-27- بررسی عملکرد محیط کشت.......................... 124
2-1-27- نتایج کشت نمونه های ارسالی ..................... 124
1-2-1-27- نتایج روز پنجم ............................ 125
2-2-1-27- نتایج روزهفتم تا دهم........................ 125
3-2-1-27- نتایج روزپانزدهم............................ 126
2-27- نتایج PCR ...................................... 126
1-2-27- نتایج PCR نمونه ها با پرایمر جنس ............. 126
2-2-27- تائید کلونی های جدا شده....................... 127
3-2-27- نتایج PCR نمونه ها با پرایمر کلاستر مایکوئیدس... 127
4-2-27- نتایج PCR نمونه ها با پرایمر گونه آگالاکتیه.... 128
5-2-27- نتایج PCR نمونه ها با پرایمر گونه مایکوئیدس کلونی بزرگ 129
3-27- نتایج کالبد گشایی............................... 130
1-3-27- معیار انتخاب ................................. 130
فهرست
عنوان صفحه
فصل چهارم: بررسی نتایج
نمودارها .............................................. 131
فصل پنجم: بحث
28- بحث .............................................. 139
1-28- ضایعات کالبد گشایی................................. 139
2-28- میزان وقوع عفونت تنفسی مایکوپلاسما ............... 141
3-28- روش کشت......................................... 142
4-28- روش PCR ...................................... 147
5-28- فراوانی گونه ها ................................ 152
29- خلاصه انگلیسی...................................... 159
30- منابع ............................................ .. 160
فهرست تصاویر
عنوان .................................................................................................. صفحه
تصویر شماره 1: کلونی تخم مرغی شکل مایکوپلاسما پس از سومین ساب کالچر 125
تصویر شماره 2: آزمایش PCR برای تشخیص جنس مایکوپلاسما در نمونه ریه 127
تصویر شماره 3: آزمایش PCR برای تشخیص کلاستر مایکوئیدس در نمونه ریه 128
تصویر شماره 4: آزمایش PCR برای تشخیص گونه آگالاکتیه درنمونه ریه ............................................. ............................................. ............................................. ............................................. 129
تصویر شماره 5: آزمایش PCR برای تشخیص گونه مایکوئیدس مایکوئیدس کلونی بزرگ 130
فهرست جداول
عنوان .................................................................................................. صفحه
جدول1: طبقه بندی مایکوپلاسما.............................. 11
جدول 2: معرفی اعضا کلاستر مایکوئیدس و خصوصیات بیماریزایی آنها 11
جدول 3: احتیاجات غذایی برای رشد مایکوپلاسماهای کلاستر مایکوئیدس 39
جدول 4 : مقادیر موردنیاز جهت تهیه مخلوط اصلی اولیه...... 112
جدول 5: مواد مورد نیاز واکنش تکثیر .................... 114
جدول6 : پرایمرهای استفاده شده در واکنش تکثیر ........... 116
جدول 7 : برنامه واکنش پرایمرها ........................ 118
جدول8: : فرمول تهیه محیط TBE(5X)........................ 120
جدول9: میزان اتیدیوم بروماید مصرفی جهت ساختن مقادیر متفاوت ژل 120
فهرست نمودارها
عنوان ........................................................................................................... صفحه
نمودار شماره 1: درصد مایکوپلاسمای جدا شده به روش کشت در عفونت تنفسی
گله‌های مورد مطالعه.................................. 132
نمودارشماره 2: درصد حضور مایکوپلاسما درعفونت تنفسی گله‌های مورد
مطالعه به روشPCR ................................... 132
نمودار شماره3 : مقایسه روشهای کشت و PCR در تشخیص مایکوپلاسما ی موجود در عفونت تنفسی گله‌های مورد مطالعه............................ 133
نمودار شماره4: مقایسه نتایج کشت وPCR نمونه‌ها در گله‌های مورد مطالعه (n=100) 133
نمودار شماره 5: مقایسه نتایج کشت و PCR مایکوپلاسما در گاو (n=50) 134
نمودار شماره 6: مقایسه نتایج کشت و PCR مایکوپلاسما در گله های گوسفند (n=30) 134
نمودار شماره 7: مقایسه نتایج کشت و PCR در گله‌های بز (n=20) 135
نمودار شماره8: نمودار شماره 8:مقایسه نتایج تشکیل کدورت در محیط براث و PCR مایکوپلاسما در گله‌های مورد مطالعه (n=100) ............. 135
نمودار شماره 9: نمودار شماره9:مقایسه نتایج ایجاد کدورت در محیط براث و جداسازی مایکوپلاسما در گله‌های مورد مطالعه (n=100) ............. 136
نمودار شماره 10: نمودار شماره10: مقایسه نتایج تشکیل کدورت در محیط براث و PCR مایکوپلاسما
در گله‌های گاو(n=50).................................. 136
نمودار شماره 11: نمودار شماره 11:مقایسه نتایج تشکیل کدورت در محیط براث و PCR مایکوپلاسما
در گله‌های بز (n=20).................................. 137
نمودار شماره12: مقایسه نتایج تشکیل کدورت در محیط براث و PCR مایکوپلاسما در گله‌های گوسفند (n=30) ............................... 137
پایان نامه رشته دامپزشکی - بررسی عفونت ریوی مایکوپلاسمایی ناشی از مایکوپلاسما مایکوئیدس واریته مایکوئیدس با فرمت Word