اس فایل

مرجع دانلود فایل ,تحقیق , پروژه , پایان نامه , فایل فلش گوشی

اس فایل

مرجع دانلود فایل ,تحقیق , پروژه , پایان نامه , فایل فلش گوشی

پایان نامه بررسی ابعاد مولکولی و مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی Allium Hirtifolium

اختصاصی از اس فایل پایان نامه بررسی ابعاد مولکولی و مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی Allium Hirtifolium دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

پایان نامه بررسی ابعاد مولکولی و مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی Allium Hirtifolium


پایان نامه بررسی ابعاد مولکولی و مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی  Allium Hirtifolium

 

 

 

 

 

 

 

فرمت فایل:word  (قابل ویرایش)

تعداد صفحات :113

فهرست مطالب :

فهرست مندرجات

عنوان صفحه

فهرست مندرجات.. ﻫ
فهرست اختصارات ی
فهرست نمودارها و اشکال
فهرست جداول
چکیده 
1
فصل اول: مقدمه 4
فصل دوم: گیاهشناسی 
2-1- گیاهشناسی Allium hirtifolium 8
2-2- انتشار جغرافیایی 8
2-3- کاریولوژی 8
2-4- موارد مصرف 10 
2-4-1- مصارف غذایی 10
2-4-2- استفاده در طب سنتی 10
2-5- تحقیقات انجام شده در Allium hirtifolium10
2- 6- جنس Allium spp. 2-6-1- مشخصات عمومی و طبقه بندی 11 
2-6-2- خصوصیات شیمیایی 13
2-6-3- کاریولوژی 13 
2-7- ارزشهای اقتصادی گونه های جنس آلیوم 14
2-8- زیرجنسهای جنس آلیوم 14
2-8-1- زیر جنس Allium 15 
2-8-2- زیر جنس Rhizirideum15 
2-8-3- زیر جنس Melanocrommyum15
عنوان صفحه
2-8-4- زیر جنس Amerallium
2-9- مراحل نمو در آلیومها 16
2-9-1- جوانه زنی بذر 16
2-9-2- سبز شدن بذور و نمو گیاهان نورسته 17
2-9-3- دوره جوانی و انتقال به مرحله تولید مثلی 17
2-9-4- رشد و نمو سالیانه پس از بلوغ 19
2-9-4-1- گونه های پیاز دار 19
2-9-4-1-1- گونه های پیازدار با مبدا مدیترانه 20
2-9-4-1-2- گونه های گلدار با مبدا ایرانو تورانی 20
2-9-4-3- آلیومهای خوراکی 23
2-9-5- تکثیر 24 
2-9-5-1- تکثیر از راه بذر 24
2-9-5-2- تکثیر رویشی 25
2-9-5-3- کشت بافت در آلیومها 26
2-10- اصلاح ژنتیکی در آلیومها و استفاده از گونه های وحشی Allium26
2-10-1- بانک های بذر آلیوم در دنیا 27 
2-10-2- بانک های ژن آلیوم در دنیا 27
2-10-3- عملیات نگهداری و اصلاحی در مراکز جمع آوری و نگهداری آلیوم ها 27
2-11- بررسی تنوع ژنتیکی و عوامل ایجاد تنوع 28
2-11-1- تجزیه کلاستر 31 
2-11-2- تجزیه به مولفه اصلی 31
2-11-3- معیارهای فاصله یا شباهت ژنتیکی 32
2-12- مراکز تنوع جنس Allium32
2-13- مصارف مختلف آلیومها در دنیا 33
فصل سوم: بررسی مولکولی به کمک نشانگرRAPD

عنوان صفحه

3-1- نشانگر چیست؟ 38
3-2- کاربرد های نشانگرهای مولکولی 38
3-3- انواع نشانگرها 39
3-4- نشانگر RAPD40
3-4-1- مراحل روش RAPD41
3-4-1-1- استخراج DNA41
3-4-1-2- تخمین غلظت DNA41
3-4-1-3- انجام واکنش 42 RAPD
3-4-1-4- الکتروفورز محصولات 42 PCR
3-4-2- تجزیه داده های RAPD43
3-4-3- تکرار پذیری RAPD43
3-4-3-1- کیفیت و کمیت 43 DNA
3-4-3-2- آلودگی بیولوژیک 43
3-4-3-3- غلظت آغازگر 44
3-4-3-4- غلظت منیزیم 44
3-4-3-5- تکرارپذیری نیمرخ های دستگاه PCR44
3-4-3-6- زمان واسرشته سازی 44
3-4-3-7- درجه حرارت اتصال 45
3-4-3-8- مدت زمان بسط یا توسعه طویل شدن 45
3-4-3-9- دقت کردن در پیپت نمودن 45
3-5- مزایای RAPD 45
3-6- معایب RAPD46 
3-7- تحقیقات انجام شده با کمک نشانگر RAPD در جنس الیوم 47 
فصل چهارم: نشانگرهای مورفولوژیک

عنوان صفحه

4-1- مزایای نشانگرهای مورفولوژیک 50
4-2- معایب نشانگرهای مورفولوژیک 50
4-3- مقایسه مورفولوژیک آلیوم ها 51
4-3-1- گروه های پیازدار 52
4-3-2- گروه های ریزوم دار 52
4-3-3- گونه های آلیوم خوراکی 52
4-4- کاربرد نشانگرهای مورفولوژیک در جنس آلیوم 53
4-5- اساس ژنتیکی بعضی صفات مورفولوژیک در آلیوم ها 55
4-5-1- برگ و نشاء ها 55
4-5-2- ساقه گلدهنده 56
4-5-3- پیاز 56
4-5-4- گل 57

فصل پنجم: بررسی فیتوشیمیایی 
5-1- تاریخچه استفاده از آلیومها در تغذیه و درمان بیماریها 59
5-2- ترکیبات شیمیایی موجود در گیاهان جنس آلیوم 60
5-2-1- ترکیبات فرار 60
5-2-2- ترکیبات غیر فرار 60
5-3- تاریخچه شناسایی آلیسین 61
5-4- چگونگی تشکیل آلیسین 61
5-5- روشهای تجزیه و شناسایی اجزاء تشکیل دهنده اسانس و
عصاره های استخراج شده از گیاهان 62
5-5-1- کروماتوگرافی 62
5-5-2- کروماتوگرافی لایه نازک (TLC)63
5-5-3- کروماتوگرافی ستون 63
5-5-4- گاز کروماتوگرافی 64
عنوان صفحه

5-5-5- طیف سنجی مادون قرمز (IR)64
5-5-6- طیف سنجی ماوراء بنفش (UV) و مرئی (Visible – Spectroscopy)64
5-5-7- رزنانس مغناطیسی هسته (nmr)65
5-5-8- گاز کروماتوگرافی قدام با طیف سنجی جرم (GC-Mass)65

فصل ششم: مواد و روشها 
6-1- نمونه های گیاهی 69
6-2- دستگاههای مورد استفاده 70
6-3- مواد مورد استفاده 71
6-4- روشها 72
6-4-1- ارزیابی مورفولوژیکی 72
6-4-1-1- مواد و طرح آزمایشی 72
6-4-1-2- یادداشت برداری و ثبت خصوصیات 72
6-4-2- ارزیابی مولکولی 72
6-4-2-1- استخراج DNA73
6-4-2-2- ارزیابی کمی و کیفی نمونه های DNA74
6-4-2-3- الکتروفورز DNA75
6-4-2-4- شرایط واکنشهای PCR-RAPD76
6-4-3- ارزیابی فیتوشیمیایی 78
6-4-3-1- روش کروماتوگرافی لایه نازک (TLC) در تشخیص وجود آلیسیس 79
6-4-3-2- تعیین مقدار آلیسیس به روش اسپکتروفتومتری 80
6-4-3-2-1- آماده سازی پیازهای A.hirtifolium81
6-4-3-2- نحوه اندازه گیری جذب در دستگاه اسپکتروفتومتری 82

فصل هفتم: بحث و نتایج 84
عنوان صفحه

7-1- گروه بندی اکوتیپها با نشانگر RAPD85
7-2- گروه بندی بر اساس صفات مورفولوژیک 90
7-3- بررسی اکوتیپها از دیدگاه فیتوشیمیایی 92
7-4- مقایسه داده های RAPD و مورفولوژیکی 96
7-5- مقایسه داده های مورفولوژیک و آلیسیس 96
7-6- نتیجه گیری نهایی 98
7-7- پیشنهادات 98
منابع 100
خلاصه پایان نامه به زبان انگلیسی 107

فهرست نمودارها و اشکال 
عنوان صفحه
شکل2-1 . تصویر Allium hirtifolium
شکل7-1-(الف).الگوی باندی تکثیرشده نمونه های 1تا8 DNA با اغازگ ر265
شکل7-1-(ب). الگوی باندی تکثیر شده نمونه های9تا16 DNA با اغازگر 265
شکل7-1. روابط خویشاوندی اکوتیپهای Allium hirtifolium با استفاده از
داده های RAPD
شکل7-.2 روابط خویشاوندی اکوتیپهای Allium hirtifolium با استفاده از
داده های مورفولوژی
شکل7- 3-(الف ).الیسین موجود د ر اکوتیپهای Allium hirtifolium استخراج
شده بوسیله روش TLCو عکسبرداری زیر UV
شکل7- 3-(ب). مقدار الیسین موجود در اکوتیپهای Allium hirtifolium
فهرست جداول 
عنوان صفحه
جدول6-1. مناطق جمع اوری نمونه های گیاهی
جدول6-2. وسایل و دستگاههای مورد نیاز برای بررسی های مولکولی و فیتوشیمیایی
جدول6-3. مواد مورد نیاز برای بررسی های مولکولی و فیتوشیمیایی
جدول6-4-2-4. اغازگرهای مورد استفاده در بررسی های مولکولی
جدول7-1. چند شکلی و تعداد ژنوتیپهای جدا شده توسط اغازگرها
جدول7-2-(الف). تجزیه واریانس صفات مورفولوژیکی
جدول7-2-(ب). مقایسه میانگین صفات مورفولوژیکی با ازمون دانکن
جدول7-3. الیسین در اکوتیپهای Allium hirtifolium
جدول7-4. همبستگی صفات مورفولوژیک والیسین
چکیده
بیش از 139 گونه آلیوم در ایران گزارش شده اند که حدود 30 گونه آن بومی خود ایران هستند . در این میان Allium hirtifolium به لحاظ اینکه تاکنون تحقیقاتی از لحاظ مولکولی و یا مورفولوژیکی بر روی آن انجام نشده و تعداد تحقیقاتی که در مورد این گونه خاص در دنیا انجام گردیده, به لحاظ کمی بسیار اندک می باشد, لذا بر آن شدیم تا با جمع آوری این گیاه از نقاط اصلی رویش ان که عمدتا مناطق مرکزی ایران و خصوصاً استان لرستان است, به بررسی ابعاد مولکولی و مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی آن بپردازیم. بررسی های ما بر روی این گونه شامل بخش های زیر می باشد:
بخش اول: جمع آوری و نگهداری مواد گیاهی
ابتدا، نمونه های گیاهی از شانزده منطقه مختلف استان لرستان جمع آوری و در مرحله بعد مرکز تحقیقات منابع طبیعی استان لرستان و همچنین پژوهشکده علوم گیاهی دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی تعیین هویت گردید و سپس غده ها تا انجام آزمایشات بعدی در یخچال و دمای 4 درجه سانتیگراد نگهداری شدند.
بخش دوم: بررسی مزرعه ای
غده های آلیوم در آذرماه 1384 در مزرعه تحقیقاتی دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد در سه تکرار، در هر ردیف 4 غده از هر اکوتیپ خاص به طور تصادفی انتخاب و سپس با فاصله 20 سانتی متر روی ردیف و 35 سانتی متر بین ردیف کشت شدند.
پس از رویش از سطح خاک، اطلاعات مورفولوژیکی از قبیل طول برگ، عرض برگ، ارتفاع ساقه گلدهنده، تعداد برگ، وزن متوسط غده ها در بوته، تعداد غده در بوته، مدت زمان کاشت تا سبز شدن و مدت زمان کاشت تا گل دهی، در هر بوته اندازه گیری شدند.
بخش سوم: بررسی مولکولی با تکنیک RAPD
الف) کشت در گلخانه: در فروردین ماه 1385 تعداد دو غده از هر اکوتیپ به طور تصادفی انتخاب و در گلخانه دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد، در گلدان کشت شدند و پس از رویش از سطح خاک و پس از حدود 10 روز برگهای جوان چیده شده و سریعاً در داخل یخ به آزمایشگاه بیوتکنولوژی پژوهشکده بوعلی محل انجام آزمایشات مولکولی، منتقل گردید و در فریزر و در دمای 20- درجه سانتیگراد تا زمان انجام آزمایش نگهداری شد.
ب) استخراج DNA : با روش Doyle and Doyle یا Hot CTAB ، DNA ها استخراج و پس از استخراج با دستگاه UVTECH، مشاهده گردیده و عکس برداری شدند. با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتری کیفیت DNA بررسی شد و نسبت جذب 280/260 اکثر DNA ها بین 2-8/1 بودند که نشان از کیفیت خوب DNA استخراج شده از لحاظ عدم آلودگی به پروتئین و یا DNA و پلی ساکاریدها و ... بود.
ج) PCR : با کمک 20 آغازگر ساخت دانشگاه بریتیش کلمبیا که 16 تا از آنها چند شکلی خوبی نشان دادند و براساس روش آدامز (1998),PCR انجام گردید و پس از الکتروفورز ژل اگارز 5/1 درصد و عکسبرداری از ژل ها ، با نرم افزار(NTSYS 2/02) مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفته و براساس الگوریتم UPGMA دندروگرام رسم گردید.
بخش چهارم: بررسی فیتوشیمیایی
از آنجا که اکثر ترکیبات شیمیایی آلیوم ها ترکیبات گوگردی بوده و چیزی حدود 70 % این ترکیبات را هم آلیسین تشکیل می دهد لذا بررسی فیتو شیمیایی بر روی درصد آلیسین در اکوتیپ های مختلف انجام گردید و عصاره موجود در غده های گیاهان به روش بریتیش فارماکوپه, با مقداری تغییرات استخراج و با روش کاهش جذب در طول موج 324 نانومتر و پس از اختلاط با ماده ای به نام4 – مرکاپتو پیریدین میزان آلیسین اندازه گیری شد.
نتایج حاصل از بررسی مورفولوژیک
پس از ترسیم دندروگرام با کمک نرم افزار SAS شش گروه مختلف مورفولوژیک بدست آمد که تنوع موجود در آنها ارتباط زیادی با تنوع جغرافیایی نداشت. تجزیه واریانس و آزمون دانکن، اختلاف معنی داری را در بین بعضی صفات در اکوتیپ ها نشان داد.

نتایج حاصل از بررسی مولکولی RAPD 
در مجموع از 20 آغازگر استفاده شده، 16 تا چند شکلی بسیار بالایی را نشان دادند.درصد چند شکلی تمام آنها بالای 90% برآورد گردید و مشخص شد که تمام آنها از کارایی بالایی در تشخیص ژنوتیپ های مختلف برخوردار هستند. بررسی دندروگرام حاصل از ماتریس 0 و 1 ، اکوتیپ ها را در هر 8 گروه مختلف قرار داد. در این بررسی ارتباط زیادی بین گروه بندی مولکولی و جغرافیایی یافت نگردید.
نتایج حاصل از بررسی فیتوشیمیایی
میزان آلیسین در اکوتیپ ها با هم تفاوت داشت و از 61 /0 تا 63/3 میلی گرم آلیسین در هر گرم غده تازه متفاوت بود.میزان آلیسین با بعضی صفات مورفولوژیک از قبیل وزن غده همبستگی مثبت داشت. از مقایسه نتایج بدست آمده چنین استنباط می شود که تنوع ژنتیکی در میان اکوتیپ ها زیاد بوده بطوریکه حتی در اکوتیپ های یک منطقه نیز این مسئله وجود دارد و علت این تنوع زیاد ژنتیکی ممکن است عواملی از قبیل جهش های ژنی و نیز روش های تولید مثل جنسی باشد که البته این مسئله نیاز به بررسی بیشتری دارد.
در این بررسی مهمترین روش تشخیص چند شکلی و اختلافات ژنتیکی میان اکوتیپ ها استفاده از نشانگر RAPD بود. این روش هم روشی ساده و هم دقیق است و قادر به شناسایی اختلافات کوچک ژنتیکی می باشد.

استفاده از نشا نگرهای ژنتیک قدمتی برابر با تاریخ بشر دارد. انسانهای نخستین، حتی آنهایی که هنوز کشاورزی را فرا نگرفته بودند و برای ادامه زندگی مجبور به جمع آوری بذر و میوه گیاهان بودند، بدون آنکه خود بدانند از نشانگرهای مورفولوژیک برای شناختن و تمایز انواع بذر و میوه و جانوران وحشی استفاده می کردند و برخی را به برخی دیگر ترجیح می دادند، اما به صورت مدون و دانش مدار، شاید مندل، نخستین کسی بود که از نشا نگرهای مورفولوژیک یا نشا نگرهای مبتنی بر فنوتیپ برای مطالعه چگونگی توارث صفات در نخود فرنگی استفاده کرد (9). 
تا قبل از مندل، اصلاح گیاهان به عنوان هنر محسوب می شد و گزینش بر اصول علمی استوار نبود و اصلاحگران موفق افرادی بودند که استعداد زیادتری در تشخیص تنوع موجود داشتند. با پیشرفت علم ژنتیک و علوم وابسته، اصلاح گیاهان، با این علوم مرتبط شد و دیگر هنر و مهارت به تنهایی در امر گزینش دخالت نداشت و به نژادگر بنابر اصول علمی و با تعمّد می توانست تنوع و تغییراتی در گیاهان ایجاد نماید و از این راه واریته ها و ارقام جدید با صفات دلخواه به وجود آورد. (15) استفاده از نشا نگرهای ژنتیک، خصوصاً نشانگرهای مولکولی، ابزاری برای شناسایی تنوع و نوع تنوع هستند.(5) تنوع گونه ها در محیط به توانایی تولید و پایداری آن اکوسیستم وابسته است.(9)
2-1- گیاهشناسی Allium hirtifolium 
Syn: Allium atropurpureum(78)
این گونه، یک گونه وحشی و پایاست. دارای پیاز تخم مرغی به قطر 4-5/2 سانتی متر. با پوشش خارجی خاکستری رنگ و متشکل از رشته ها یا الیاف جدا از هم و در حال تخریب است. ساقه گلدهنده ، بلند و 120-80 سانتی متر طول داشته و برهنه و بدون برگ می باشد، برگها خطی به اندازه 30-20 سانتیمتر، در پایین نادوانی و گود، دارای پرز سفید یا کرکهای نازک و نرم. گل ها صورتی کم رنگ یا صورتی متمایل به بنفش، مجتمع در چترهای پر گل و محدب، دمگل 6بار بلندتر از گل، گلپوش دارای تقسیمات خطی نرم و سست، تاشده، میله پرچمها کوتاهتر از گل پوش، در پایین پهن و عریض. 
موسم گل: اردیبهشت ماه (11)
2-2- انتشار جغرافیایی
غرب: سنندج، باختران، همدان، الوند، اراک، اشترانکوه، خرم آباد، بخش مرکزی: اصفهان، بختیاری، فارس: دشت ارژن، کوه بیل، کاکوم.
2-3- کاریولوژی (20)
بر اساس گزارش (2002) Neriman ozhatay تعداد کروموزومهای پایه A.Atropurpureum یا A.hirtifolium، x=8 است و این گونه یک گونه دیپلوئید بوده و لذا 16=x2=n2
2-4- موارد مصرف A.hirtifolium
2-4-1- مصارف غذایی: (60)
این گونه در ایران تحت عنوان موسیر شناخته می شود و غده های خشک شده و یا تازه آن در مقیاس ها کم تا متوسط برای مصارف محلی و یا صادرات به کشورهای حوزه خلیج فارس بکار می روند. غده های این گونه بطور گسترده ای در ترکیبات غذایی مختلفی از قبیل ماست، ترشی، برنج، گوشت، سس ها و سالادها به عنوان چاشنی و طعم دهنده استفاده می شود. 
2-4-2- استفاده در طب سنتی ایران
در طب سنتی ایران، این گونه به عنوان گیاهی شبیه پیاز شناخته شده و استفاده از آن در درمان درد معده، نقرس، ورم مفاصل، ترشح زیاد غدد چربی در روی پوست سر، درمان بیماریهای پوستی و بواسیر توصیه شده است.
از این گیاه همچنین به عنوان داروی تقویت قوای جنسی و همچنین هضم کننده غذا نام برده شده است.(7)
2-5- تحقیقات انجام شده در مورد Allium hirtifolium
تاکنون تحقیقات بسیار اندکی بر روی این گونه انجام شده است و تنها سه مورد تحقیق انجام گرفته که به طور خلاصه در زیر به انها اشاره می شود: 
1- اثرات ضد تریکوموناسی آزمایشگاهی A.hirtifolium (موسیر ایرانی) در مقایسه با مترونیدازول(90) :
تریکوموناس یک انگل تک یاخته تاژک دار است که سبب بیماریهای مسری و ارثی و ایجاد تورم و التهاب در دستگاه تناسلی زنان می گردد و مهمترین و شایعترین تاژکدار بیماری زا در اروپا و امریکای شمالی است.
شیوع این بیماری در جوامع شهری با فعالیت های جنسی پر خطر و همچنین جوامع جهان سوم بیشتر اتفاق می افتد . براساس یک مطالعه آماری سالانه حدود 4/7 میلیون مورد هر ساله در جهان اتفاق می افتد. مهمترین داروی درمان کننده این بیماری در بعضی کشورها مترونیدازول است .در این تحقیق عصاره هیدروالکلی و عصاره دی کلرومتا نیک موسیر ایرانی در مخلوط 50/50(آب – اتانل) تهیه شد. حداقل غلظت مما نعت کنندگی (MIC) عصاره هیدرالکلی و دی کلرومتا نیک و همچنین مترونیدازول به طور جداگانه به ترتیب10و 5و 2mg/ml تعیین گردید. موسیر ایرانی از رشد T.vaginalis در مقدار و زمان اندک، ممانعت به عمل آورده است. اثرات ضد تریکوموناسی این گیاه را می توان به ترکیبات سولفوره الی از قبیل Allicin، ajoene نسبت داد که اثرات ضد میکروبی آنها ثا بت شده است.
بررسی مولکولی به کمک نشانگر RAPD
نشانگرهای ژنتیک قدمتی برابر با تاریخ بشر دارند وانسانهای نخستین حتی آنهایی که هنوز کشاورزی را فرا نگرفته بودند و برای ادامه زندگی به جمع آوری بذر و میوة گیاهان بودند، بدون آنکه خود بدانند از مارکرهای مورفولوژیک برای شناختی و تمایز انواع بذر میوه جانوران وحشی استفاده می کردند و برخی را بر برخی دیگر ترجیح می دادند، اما به صورت مدرن و دانش مدار شاید مندل اولین کسی بود که نشانگرهای مورفولوژیک یا نشانگرهای مبتنی بر فنوتیپ را برای مطالعه چگونگی توارث صفات در نخود فرنگی استفاده کرد. (15)
3-1- نشانگر چیست؟ 
صفاتی از قبیل آزاد بودن و یا چسبیده بودن لاله گوش که در بین افراد جامعه تظاهر متفاوتی دارند و وراثتی هستند و یا صفت گروه خونی که در افراد مختلف متفاوت و از والدین به فرزندان به ارث می رسند و صفاتی از این دست که بتوان آنها را برای شناسایی حاملین آن صفات بکار برد، نشانگر محسوب می شوند. بطور کلی هر صفتی که در بین افراد، متفاوت باشد، ناشی از تفاوت موجود بین ردیف های دی. ان. ای کروموزوم های آنهاست که به نتاج نیز منتقل می شود. حتی صفاتی که تحت تاثیر شرایط محیط نه به صورت متفاوت بروز می کنند، بازتاب تفاوتهای موجود در ردیف های دی. ان. ای آنهاست. (15)
3-2- کاربردهای نشانگرهای مولکولی 
نشانگرهای مولکولی در زمینه های مختلف مانند مطالعات فیلوژنتیک، تعیین میزان قدامت، رده بندی گیاهی ، تهیه نقشه های ژنتیک، تعیین محل ژن های کنترل کنندة صفات کمی و کیفی، انتقال ژن از گونه های وحشی، تسهیل انتخاب به کمک نشانگرها، تشخیص بیماریها، قرنطینه نباتی ،تشخیص ارقام و ... کاربرد دارند. (17)
در مقایسه با بعضی گیاهان مثل گوجه فرنگی و سبزیجات و سایر محصولات زراعی، مطالعات مولکولی در گونه های ALLIUM کمی دیرتر شروع شده و اطلاعات مولکولی و تکنولوژیهای جدید هنوز فاصله زیادی دارد.(75)
کاربرد وکتورها به عنوان واسطه های انتقال ژن و همچنین سیستم های انتقال مستقیم ژن در آلیومها بکار برده شده اند.(26)پیشرفت در توسعه آلیومها، بستگی به تنوع ژنتیکی موجود دارد. بنابراین کاهش سریع منابع ژنتیکی، ممکن است کوششهای آینده ، برای گسترش در کلسیونهای طبقه بندی و تکامل ذخیره های ژنی را در معرض خطر قرار دهد. در مقایسه با تنوع محدود جنس Lycopersicom که جنسی با 9 گونه است، ذخیرة ژنی آلیوم بی نهایت غنی است و پتانسیل بزرگی برای استفاده دارد.( 94)
استفاده از روشهای کلاسیک و همچنین ابزار جدید مشتمل بر نشانگرهای ملکولی برای عملکرد و همچنین صفات کیفی و نیز نر عقیمی و همچنین برای تلاقی های بینی گونه ای، اطلاعات عمیقتر ژنتیکی و فیزیولوژیکی و نیز مکانیسم های کنترل وراثتی مراحل حیاتی از قبیل گلدهی و خواب گونه ها برای آسانتر شدن، و برداشتن یک قدم بزرگ در توسعه این گیاهان مهم مورد نیاز است. (31 )


دانلود با لینک مستقیم


پایان نامه بررسی ابعاد مولکولی و مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی Allium Hirtifolium

پروپوزال ارشد زیست شناسی گرایش فیزیولوژی - پاسخ های فیزیولوژیکی و مورفولوژیکی گندم آبی به تنش شوری - با فرمت word

اختصاصی از اس فایل پروپوزال ارشد زیست شناسی گرایش فیزیولوژی - پاسخ های فیزیولوژیکی و مورفولوژیکی گندم آبی به تنش شوری - با فرمت word دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

پروپوزال ارشد زیست شناسی گرایش فیزیولوژی - پاسخ های فیزیولوژیکی و مورفولوژیکی گندم آبی به تنش شوری - با فرمت word


 پروپوزال ارشد زیست شناسی گرایش فیزیولوژی - پاسخ های فیزیولوژیکی و مورفولوژیکی گندم آبی به تنش شوری - با فرمت word

فهرست : 16 صفحه

 

فرم در خواست تصویب موضوع:

 

پایان نامه کارشناسی ارشد و دکترای حرفه ای

 

 

 

 

عنوان تحقیق :پاسخ های فیزیولوژیکی و مورفولوژیکی چند رقم از گندم آبی به تنش شوری در منطقه اقلید فارس

 

 

 

 رشته :زیست شناسی علوم گیاهی گرایش فیزیولوژی

 

 

 

مقطع :کارشناسی ارشد

 

عنوان تحقیق به انگلیسی                : physiological and morphological responses

of some wetland wheat cultivars to salt stress

 


دانلود با لینک مستقیم


پروپوزال ارشد زیست شناسی گرایش فیزیولوژی - پاسخ های فیزیولوژیکی و مورفولوژیکی گندم آبی به تنش شوری - با فرمت word

بررسی اثر اسید سالیسالیک بر برخی از پارامترهای فیزیولوژیکی و مورفولوژیکی گیاه زینتی اسطوخودوس (Lavandula angustifolia) در شرایط

اختصاصی از اس فایل بررسی اثر اسید سالیسالیک بر برخی از پارامترهای فیزیولوژیکی و مورفولوژیکی گیاه زینتی اسطوخودوس (Lavandula angustifolia) در شرایط تنش خشکی دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

بررسی اثر اسید سالیسالیک بر برخی از پارامترهای فیزیولوژیکی و مورفولوژیکی گیاه زینتی اسطوخودوس (Lavandula angustifolia) در شرایط تنش خشکی


بررسی اثر اسید سالیسالیک بر برخی از پارامترهای فیزیولوژیکی و مورفولوژیکی گیاه زینتی اسطوخودوس (Lavandula angustifolia) در شرایط تنش خشکی

چکیده
پژوهشی جهت بررسی اثر اسید سالیسالیک بر تعدادی از پارامترهای فیزیولوژیکی و مورفولوژیکی گیاه زینتی اسطوخودوس
(Lavandula angustifolia) در شرایط تنش خشکی در سال 1931 در شرایط گلخانه ای در شهرستان کرج آغاز گردید. این پژوهش با
1 میلی مولار( و تنش خشکی 4 / 0 و و 5 /7 ، 0/1 ، استفاده از آزمایش فاکتوریل 2 عاملی شامل عامل اسید سالیسالیک در 4 سطح) 0
75 %و 25 %( در قالب طرح کامل تصادفی با 9 تکرار انجام گرفت. نتایج به دست آمده نشان دهنده اثر ،%100،% سطح ظرفیت زراعی) 0
منفی تنش در پارامترهای فیزیولوژیکی و مورفولوژیکی گیاه زینتی اسطوخودوس و نقش مثبت اسید سالیسالیک در بهبود آن می باشد.
نتایج نشان داد که کاربرد سطوح مختلف اسید سالیسالیک در هر سه شرایط رطوبتی خاک سبب افزایش مطلوبیت در بسیاری از صفات
فوق گردید. نتایج به دست آمده نشان نقش مثبت سالیسالیک اسید در افزایش مقاوت گیاهان نسیت به تنش خشکی می باشد. بیشترین
0 میلی مولار تیمار شده / میزان پتاسیم در گیاهانی مشاهده شد که به صورت 21 روز یک بار آبیاری شده بودند با سالیسالیک اسید 1
بودند. این نتایج نشان میدهد که گیاهان اسطوخوطوس در حضور اسید سالیسالیک قابلیت تنظیم اسمزی از طریق افزایش میزان
پتاسیم را دارا می باشد.
واژه های کلیدی
تنش خشکی، اسید سالیسالیک ، پارامترهای فیزیولوژیکی، اسطوخودوس


دانلود با لینک مستقیم


بررسی اثر اسید سالیسالیک بر برخی از پارامترهای فیزیولوژیکی و مورفولوژیکی گیاه زینتی اسطوخودوس (Lavandula angustifolia) در شرایط تنش خشکی

پایان نامه بررسی ابعاد مولکولی و مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی Allium Hirtifolium

اختصاصی از اس فایل پایان نامه بررسی ابعاد مولکولی و مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی Allium Hirtifolium دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

پایان نامه بررسی ابعاد مولکولی و مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی Allium Hirtifolium


پایان نامه بررسی ابعاد مولکولی و مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی Allium Hirtifolium

این فایل در قالب ورد و قابل ویرایش در 112 صفحه می باشد.

 

دانلود پایان نامه بررسی ابعاد مولکولی و مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی Allium Hirtifolium

 

فهرست مطالب:           ﻫ
فهرست اختصارات            ی
فهرست نمودارها و اشکال
فهرست جداول
چکیده      
       1
فصل اول: مقدمه                                    4
فصل دوم: گیاهشناسی                     
2-1- گیاهشناسی Allium hirtifolium                          8
2-2- انتشار جغرافیایی       8
2-3- کاریولوژی             8
2-4- موارد مصرف          10
2-4-1- مصارف غذایی     10
2-4-2- استفاده در طب سنتی                                     10
2-5- تحقیقات انجام شده در             Allium hirtifolium10
2- 6-    جنس                  Allium  spp. 2-6-1- مشخصات عمومی و طبقه بندی                                  
2-6-2- خصوصیات شیمیایی                                      13
2-6-3- کاریولوژی          13   
2-7- ارزشهای اقتصادی گونه های جنس آلیوم                     14
2-8- زیرجنسهای جنس آلیوم                                      14
2-8-1- زیر جنس Allium15             
2-8-2- زیر جنس                                Rhizirideum15               
2-8-3- زیر جنس                       Melanocrommyum15
عنوان                صفحه
2-8-4- زیر جنس           Amerallium
2-9- مراحل نمو در آلیومها               16
2-9-1- جوانه زنی بذر                    16
2-9-2- سبز شدن بذور و نمو گیاهان نورسته                                17
2-9-3- دوره جوانی و انتقال به مرحله تولید مثلی                          17
2-9-4- رشد و نمو سالیانه پس از بلوغ19
2-9-4-1- گونه های پیاز دار           19
2-9-4-1-1- گونه های پیازدار با مبدا مدیترانه                             20
2-9-4-1-2- گونه های گلدار با مبدا ایرانو تورانی                        20
2-9-4-3- آلیومهای خوراکی           23
2-9-5- تکثیر                              24                  
2-9-5-1- تکثیر از راه بذر             24
2-9-5-2- تکثیر رویشی                25
2-9-5-3- کشت بافت در آلیومها     26
2-10- اصلاح ژنتیکی در آلیومها و استفاده از گونه های وحشی                                     Allium26
2-10-1- بانک های بذر آلیوم در دنیا 27          
2-10-2- بانک های ژن آلیوم در دنیا  27
2-10-3- عملیات نگهداری و اصلاحی در مراکز جمع آوری و نگهداری آلیوم ها                          27
2-11- بررسی تنوع ژنتیکی و عوامل ایجاد تنوع                            28
2-11-1- تجزیه کلاستر                 31           
2-11-2- تجزیه به مولفه اصلی        31
2-11-3- معیارهای فاصله یا شباهت ژنتیکی                                32
2-12- مراکز تنوع جنس      Allium32
2-13- مصارف مختلف آلیومها در دنیا 33
فصل سوم: بررسی مولکولی به کمک نشانگرRAPD
3-1- نشانگر چیست؟                            38
3-2- کاربرد های نشانگرهای مولکولی        38
3-3- انواع نشانگرها                              39
3-4- نشانگر                           RAPD40
3-4-1- مراحل روش               RAPD41
3-4-1-1- استخراج                   DNA41
3-4-1-2- تخمین غلظت            DNA41
3-4-1-3- انجام واکنش 42          RAPD
3-4-1-4- الکتروفورز محصولات 42 PCR
3-4-2- تجزیه داده های           RAPD43
3-4-3- تکرار پذیری               RAPD43
3-4-3-1- کیفیت و کمیت 43         DNA
3-4-3-2- آلودگی بیولوژیک                  43
3-4-3-3- غلظت آغازگر                       44
3-4-3-4- غلظت منیزیم                       44
3-4-3-5- تکرارپذیری نیمرخ های دستگاه                            PCR44
3-4-3-6- زمان واسرشته سازی             44
3-4-3-7- درجه حرارت اتصال             45
3-4-3-8- مدت زمان بسط یا توسعه طویل شدن                              45
3-4-3-9- دقت کردن در پیپت نمودن                                     45
3-5- مزایای RAPD               45
3-6- معایب                RAPD46
 3-7- تحقیقات انجام شده با کمک نشانگر RAPD در جنس الیوم     47                            
فصل چهارم: نشانگرهای مورفولوژیک                      
4-1- مزایای نشانگرهای مورفولوژیک      50
4-2- معایب نشانگرهای مورفولوژیک      50
4-3- مقایسه مورفولوژیک آلیوم ها          51
4-3-1- گروه های پیازدار                     52
4-3-2- گروه های ریزوم دار                 52
4-3-3- گونه های آلیوم خوراکی            52
4-4- کاربرد نشانگرهای مورفولوژیک در جنس آلیوم                          53
4-5- اساس ژنتیکی بعضی صفات مورفولوژیک در آلیوم ها                  55
4-5-1- برگ و نشاء ها                        55
4-5-2- ساقه گلدهنده                          56
4-5-3- پیاز56
4-5-4- گل57

فصل پنجم: بررسی فیتوشیمیایی                                    
5-1- تاریخچه استفاده از آلیومها در تغذیه و درمان بیماریها                   59
5-2- ترکیبات شیمیایی موجود در گیاهان جنس آلیوم                          60
5-2-1- ترکیبات فرار                           60
5-2-2- ترکیبات غیر فرار                     60
5-3- تاریخچه شناسایی آلیسین                61
5-4- چگونگی تشکیل آلیسین                 61
5-5- روشهای تجزیه و شناسایی اجزاء تشکیل دهنده اسانس و
 عصاره های استخراج شده از گیاهان           62
5-5-1- کروماتوگرافی                         62
5-5-2- کروماتوگرافی لایه نازک                                      (TLC)63
5-5-3- کروماتوگرافی ستون                 63
5-5-4- گاز کروماتوگرافی                    64
5-5-5- طیف سنجی مادون قرمز     (IR)64
5-5-6- طیف سنجی ماوراء بنفش (UV) و مرئی                            (Visible – Spectroscopy)64
5-5-7- رزنانس مغناطیسی هسته   (nmr)65
5-5-8- گاز کروماتوگرافی قدام با طیف سنجی جرم       (GC-Mass)65

فصل ششم: مواد و روشها            
6-1- نمونه های گیاهی                          69
6-2- دستگاههای مورد  استفاده                70
6-3- مواد مورد استفاده                          71
6-4- روشها 72
6-4-1- ارزیابی مورفولوژیکی                 72
6-4-1-1- مواد و طرح آزمایشی            72
6-4-1-2- یادداشت برداری و ثبت خصوصیات                                72
6-4-2- ارزیابی مولکولی                       72
6-4-2-1- استخراج                  DNA73
6-4-2-2- ارزیابی کمی و کیفی نمونه های                           DNA74
6-4-2-3- الکتروفورز               DNA75
6-4-2-4- شرایط واکنشهای                                 PCR-RAPD76
6-4-3- ارزیابی فیتوشیمیایی                   78
6-4-3-1- روش کروماتوگرافی لایه نازک (TLC) در تشخیص وجود آلیسیس                           79
6-4-3-2- تعیین مقدار آلیسیس به روش اسپکتروفتومتری                  80
6-4-3-2-1- آماده سازی پیازهای                       A.hirtifolium81
6-4-3-2- نحوه اندازه گیری جذب در دستگاه اسپکتروفتومتری         82

فصل هفتم: بحث و نتایج             84
7-1- گروه بندی اکوتیپها با نشانگر                               RAPD85
7-2- گروه بندی بر اساس صفات مورفولوژیک                       90
7-3- بررسی اکوتیپها از دیدگاه فیتوشیمیایی                          92
7-4- مقایسه داده های RAPD و مورفولوژیکی                     96
7-5- مقایسه داده های مورفولوژیک و آلیسیس                       96
7-6- نتیجه گیری نهایی        98
7-7- پیشنهادات                98
منابع                     100
خلاصه پایان نامه به زبان انگلیسی         107


          فهرست  نمودارها و اشکال
   شکل2-1 . تصویر Allium hirtifolium
شکل7-1-(الف).الگوی باندی تکثیرشده نمونه های 1تا8 DNA با اغازگ ر265
شکل7-1-(ب). الگوی باندی تکثیر شده نمونه های9تا16 DNA با اغازگر 265
شکل7-1.  روابط  خویشاوندی  اکوتیپهای Allium hirtifolium  با استفاده  از
 داده های RAPD
شکل7-.2 روابط  خویشاوندی  اکوتیپهای  Allium hirtifolium با  استفاده  از
 داده های مورفولوژی
شکل7- 3-(الف ).الیسین موجود د ر اکوتیپهای  Allium hirtifolium استخراج
شده بوسیله روش TLCو عکسبرداری زیر UV
شکل7-  3-(ب).     مقدار الیسین موجود  در اکوتیپهای  Allium hirtifolium



فهرست جداول
جدول6-1. مناطق جمع اوری نمونه های گیاهی
جدول6-2. وسایل و دستگاههای مورد نیاز برای بررسی های مولکولی و فیتوشیمیایی
جدول6-3. مواد مورد نیاز برای بررسی های مولکولی و فیتوشیمیایی
جدول6-4-2-4. اغازگرهای مورد استفاده در بررسی های مولکولی
جدول7-1. چند شکلی و تعداد ژنوتیپهای جدا شده توسط اغازگرها
جدول7-2-(الف). تجزیه واریانس صفات مورفولوژیکی
جدول7-2-(ب). مقایسه میانگین صفات مورفولوژیکی با ازمون دانکن
جدول7-3. الیسین در اکوتیپهای Allium hirtifolium
جدول7-4. همبستگی صفات مورفولوژیک والیسین

چکیده:

 بیش از 139 گونه آلیوم در ایران گزارش شده اند که حدود 30 گونه آن بومی خود ایران هستند . در این میان Allium hirtifolium به لحاظ اینکه تاکنون تحقیقاتی از لحاظ مولکولی و یا مورفولوژیکی بر روی آن انجام نشده و تعداد تحقیقاتی که در مورد این گونه خاص در دنیا انجام گردیده, به لحاظ کمی بسیار اندک می باشد, لذا بر آن شدیم تا با جمع آوری این گیاه از نقاط اصلی رویش ان که عمدتا مناطق مرکزی ایران و خصوصاً استان لرستان است, به بررسی ابعاد مولکولی و مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی آن بپردازیم. بررسی های ما بر روی این گونه شامل بخش های زیر می باشد:

بخش اول: جمع آوری و نگهداری مواد گیاهی

ابتدا، نمونه های گیاهی از شانزده منطقه مختلف استان لرستان جمع آوری و در مرحله بعد مرکز تحقیقات منابع طبیعی استان لرستان و همچنین پژوهشکده علوم گیاهی دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی تعیین هویت گردید و سپس غده ها تا انجام آزمایشات بعدی در یخچال و دمای 4 درجه سانتیگراد نگهداری شدند.

بخش دوم: بررسی مزرعه ای

غده های آلیوم در آذرماه 1384 در مزرعه تحقیقاتی دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد در سه تکرار، در هر ردیف 4 غده از هر اکوتیپ خاص به طور تصادفی انتخاب و سپس با فاصله 20 سانتی متر روی ردیف و 35 سانتی متر بین ردیف کشت شدند.

پس از رویش از سطح خاک، اطلاعات مورفولوژیکی از قبیل طول برگ، عرض برگ، ارتفاع ساقه گلدهنده، تعداد برگ، وزن متوسط غده ها در بوته، تعداد غده در بوته، مدت زمان کاشت تا سبز شدن و مدت زمان کاشت تا گل دهی، در هر بوته اندازه گیری شدند.

بخش سوم: بررسی مولکولی با تکنیک RAPD

الف) کشت در گلخانه: در فروردین ماه 1385 تعداد دو غده از هر اکوتیپ به طور تصادفی انتخاب و در گلخانه دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد، در گلدان کشت شدند و پس از رویش از سطح خاک و پس از حدود 10 روز برگهای جوان چیده شده و سریعاً در داخل یخ به آزمایشگاه بیوتکنولوژی پژوهشکده بوعلی محل انجام آزمایشات مولکولی، منتقل گردید و در فریزر و در دمای 20- درجه سانتیگراد تا زمان انجام آزمایش نگهداری شد.

ب) استخراج DNA : با روش Doyle and Doyle یا Hot CTAB ، DNA ها استخراج و پس از استخراج با دستگاه UVTECH، مشاهده گردیده و عکس برداری شدند. با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتری کیفیت DNA بررسی شد و نسبت جذب 280/260 اکثر DNA ها بین 2-8/1 بودند که نشان از کیفیت خوب DNA استخراج شده از لحاظ عدم آلودگی به پروتئین و یا DNA و پلی ساکاریدها و … بود.

ج) PCR : با کمک 20 آغازگر ساخت دانشگاه بریتیش کلمبیا که 16 تا از آنها چند شکلی خوبی نشان دادند و براساس روش آدامز (1998),PCR انجام گردید و پس از الکتروفورز ژل اگارز 5/1 درصد و عکسبرداری از ژل ها ، با نرم افزار(NTSYS 2/02) مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفته و براساس الگوریتم UPGMA دندروگرام رسم گردید.

بخش چهارم: بررسی فیتوشیمیایی

از آنجا که اکثر ترکیبات شیمیایی آلیوم ها ترکیبات گوگردی بوده و چیزی حدود 70 % این ترکیبات را هم آلیسین تشکیل می دهد لذا بررسی فیتو شیمیایی بر روی درصد آلیسین در اکوتیپ های مختلف انجام گردید و عصاره موجود در غده های گیاهان به روش بریتیش فارماکوپه, با مقداری تغییرات استخراج و با روش کاهش جذب در طول موج 324 نانومتر و پس از اختلاط با ماده ای به نام4 – مرکاپتو پیریدین میزان آلیسین اندازه گیری شد.

نتایج حاصل از بررسی مورفولوژیک

پس از ترسیم دندروگرام با کمک نرم افزار SAS شش گروه مختلف مورفولوژیک بدست آمد که تنوع موجود در آنها ارتباط زیادی با تنوع جغرافیایی نداشت. تجزیه واریانس و آزمون دانکن، اختلاف معنی داری را در بین بعضی صفات در اکوتیپ ها نشان داد.

 

نتایج حاصل از بررسی مولکولی RAPD

در مجموع از 20 آغازگر استفاده شده، 16 تا چند شکلی بسیار بالایی را نشان دادند.درصد چند شکلی تمام آنها بالای 90% برآورد گردید و مشخص شد که تمام آنها از کارایی بالایی در تشخیص ژنوتیپ های مختلف برخوردار هستند. بررسی دندروگرام حاصل از ماتریس 0 و 1 ، اکوتیپ ها را در هر 8 گروه مختلف قرار داد. در این بررسی ارتباط زیادی بین گروه بندی مولکولی و جغرافیایی یافت نگردید.

نتایج حاصل از بررسی فیتوشیمیایی

میزان آلیسین در اکوتیپ ها با هم تفاوت داشت و از 61 /0 تا 63/3 میلی گرم آلیسین در هر گرم غده تازه متفاوت بود.میزان آلیسین با بعضی صفات مورفولوژیک از قبیل وزن غده همبستگی مثبت داشت. از مقایسه نتایج بدست آمده چنین استنباط می شود که تنوع ژنتیکی در میان اکوتیپ ها زیاد بوده بطوریکه حتی در اکوتیپ های یک منطقه نیز این مسئله وجود دارد و علت این تنوع زیاد ژنتیکی ممکن است عواملی از قبیل جهش های ژنی و نیز روش های تولید مثل جنسی باشد که البته این مسئله نیاز به بررسی بیشتری دارد.

در این بررسی مهمترین روش تشخیص چند شکلی و اختلافات ژنتیکی میان اکوتیپ ها استفاده از نشانگر RAPD بود. این روش هم روشی ساده و هم دقیق است و قادر به شناسایی اختلافات کوچک ژنتیکی می باشد.


دانلود با لینک مستقیم


پایان نامه بررسی ابعاد مولکولی و مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی Allium Hirtifolium